肿瘤医学H2O2损伤的ECV304细胞的细胞周期与凋亡的影响微盘下载_电子版书.pdf

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1、中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8N o v 2 4 1 1 1 5 1 3 7 1 5 1 3 蚤休醇提物对H 20 2 损伤 的E C V 3 0 4 细胞的细胞周期与凋亡的影响 高琳琳1 李福荣1 康莉1 司艳红1 王浩2 胡维诚3 1 泰山医学院病理生理学教研室 山东泰安2 7 1 0 0 0 2 山东中医药大学基础I t 学院 山东济南2 5 0 0 1 4 3 山东大学基础医学院 山东济南2 5 0 0 1 2 中国图书分类号 R2 8 4 1 R3 2 9 2 5 R3 2

2、 9 2 8 R5 4 3 5 0 2 2 R5 4 3 5 0 5 3 1 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 1 1 9 7 8 2 0 0 8 1 1 1 5 1 3 0 5 摘要 目的制备中药蚤休醇提物 研究其对H 0 2 诱导的 脐静脉内皮细胞 E C V 3 0 4 细胞 损伤的保护作用及其机制 方法体外培养E C V 3 0 4 细胞 建立氧化损伤的细胞模型 然后分为五个实验处理组 正常对照组 氧化损伤组 高浓度蚤休醇提物 E F B5 0 0n g L 组 中浓度蚤休 醇提物 5 0n g L 组 低浓度 5n g L 1 组 应用流 式细胞仪A n n e x i nV P

3、 I 染色检测该药物干预H 0 氧化损 收稿日期 2 0 0 8 0 7 1 5 修回日期 2 0 0 8 一0 8 2 0 基金项目 山东省卫生厅青年项目基金资助项目 N oJ Z 4 3 山东省 泰安市科技局科技基金资助项目 N o2 0 0 51 0 11 作者简介 高琳琳 1 9 6 6 一 女 博士 副教授 研究方向 动脉粥样 硬化发病机制 T e l 0 5 3 8 6 2 2 5 0 1 0 E m a i l 眄i a 9 9 1 2 6 m 王潘 1 9 4 5 一 男 教授 博士生导师 研究方向 中西 医结合研究动脉粥样硬化发病机制 通讯作者 T e l 0 5 3 1 8

4、 2 6 1 3 3 5 2 E m a i l w a a g h a o s h e n g h u a h o t m a i l c o m 伤前后的细胞凋亡 P I 染色检测细胞周期与凋亡的关系 R T P C R 检测各实验组c a s p a s e 3m R N A 表达的变化 结果 采用流式细胞仪P l 染色检测结果对细胞周期进行分析 表明损伤作用于E C V 3 0 4 细胞后 细胞在G o G 期的数目 增多 在S 期的数目减少 同时流式细胞仪检测可见亚二倍 体峰 而蚤休醇提物预处理以后 s 期细胞数明显增多 流 式细胞仪A n n e x i nV P I 检测方法显示

5、 损伤组的早期与晚期 凋亡率之和最高 预处理后细胞的早期与晚期凋亡率之和降 低 e a s p a s e 3m R N A 水平在各实验组的表达显示损伤组与 内参照相比的灰度值最大 经过预处理之后其值明显下降 P 9 5 用R P M l l 6 4 0 培养液稀释至5 0 0 5 0 5n g L 微孔滤膜过滤除菌 一2 0 保存备 用 碘化丙啶 P I 溶液 S i g m a A n n e x i nV F I T C 检 测试剂盒 购于北京宝赛生物技术有限公司 其他 试剂购于济南联星生物试剂公司 1 2 实验方法 1 2 1 细胞培养及干预将E C V 3 0 4 细胞在3 7 5

6、 C O 条件下培养 以含1 0 F B S 的R P M l l 6 4 0 培养液调整细胞密度至l 1 0 8 L 按每瓶2r n l 接种于2 5r n l 的细胞培养瓶 每4 8h 更换培养液1 次 待细胞融合率为7 0 8 0 时 无血清培养1 2 h 后使细胞同步化于G 0 期 然后按分组分别加药进 行预处理2 4h 再加入氧化损伤药物H O 终浓度 为1 0 0p m o l L 作用1 2h 细胞分组如下 正常 对照组 不加任何药物的培养基 氧化损伤组 H O 终浓度为1 0 0p m o l L 蚤休醇提物高 中 低剂 量预处理组 5 0 0 5 0 5n g L 1 调整各

7、组细胞 浓度为5 1 0 5 1 0 L 1 2 2 流式细胞仪P I 染色分析各实验组细胞周期 变化3 7 温箱取出各处理组细胞培养瓶 胰蛋白 酶消化 分别收集细胞放入试管中 将试管以1 0 0 0 r m i n 1 分离心5m i n 弃上清液 加入4 P B S 涡 旋方式混匀 再离心 洗涤细胞2 次 将4 C7 0 的 乙醇约0 5m l 贴壁缓慢加入试管中 固定细胞 以 1 8 0 0r m i n 1 离心细胞悬浮液5m i n 倾去固定液 再加P B S 离心洗涤细胞1 次 每1 0 6 细胞 I I d 加入 5 0 0U 的R N A 酶 使终浓度为5 0m g L 3 7

8、 保 温3 0m i n 离心去除R N A 酶 再经P B S 洗1 次 去 上清液 每1 0 6 细胞加5 0m g L 一的P IlI r I l 室温 下避光染色2 0r a i n 以后 3 0 0 目尼龙网过滤 上流 式细胞仪测定 激发波长4 8 8n m 氢离子激光 用 m u h c y e l e D N A 分析软件包进行细胞周期分析 1 2 3 流式细胞仪A n n e x i nV P I 双染分析细胞凋 亡率取1m l 细胞 10 0 0r r a i n 一 4 离心l O m i n 弃上清 加入1I I l l 冷的P B S 轻轻震荡使细胞 悬浮 l0 0 0

9、r r a i n 4 离心1 0r a i n 弃上清 重复 2 次 将细胞悬浮于2 0 0 斗l 的B i n d i n gB u f f e r 加入 1 0 山A n n e x i nV F I T C 和5 山P I 轻轻混匀 避光室 温反应1 5m i n 加入3 0 0 山的B i n d i n gB u f f e r 后用流 式细胞仪检测 E x 4 8 8n m E m 5 3 0a m 细胞凋 亡的情况 按照文献报道判定早期以及晚期凋亡 率 引 1 2 4R T P C R 方法测定各实验组E C V 3 0 4 细胞中 e a s p a s e 3 m R N

10、A 的表达 弃干净培养瓶中的培养 液 每瓶细胞加入1m lR N A 提取液 然后依次用氯 仿 异丙醇萃取 得到的R N A 沉淀物用分光光度仪 测2 6 0n m 和2 8 0a m 吸光值 计算R N A 浓度 按如 下体系进行逆转录 R N A2t r g 寡核苷酸引物1 止 R N a s i n1 山 5 缓冲液6 一 d N T P2 一 A M V 逆转 录酶 P r o m e g a 公司 4 0U 用去R N A 酶三蒸水补足 至2 5 一 4 2 1h 7 0 1 5r a i n 得到的e D N A 保存 于一2 0 C 采用软件p r e m i e r5 和p r

11、 i m e r3 分别设计 其上下游引物 引物由大连宝生物公司合成 内参 照为B a e t i n 引物序列为正义链5 C T C G G T C T G G T A C A G A T G T C G A T G 3 反义链 5 一G G T r A A C C C G G G T A A G A A l G 1 G C A 3 聚合酶链反应体系为 e D N A 模板2 一 d N T P1 山 1 0 缓冲液5 一 2 5 m m o l L M g C l 23 山 寡核苷酸引物2 0p m o l L T a q 酶1 一 灭菌三蒸水补足至5 0 斗l 混匀 9 4 预变性3 0

12、 0s 然后9 4 变性3 0s 一 5 8 退火 6 0 7 2 延伸9 0s 3 0 个循环 最后延伸6 0 0s 琼脂糖凝胶电泳分析结果 1 3 统计学处理实验数据以x s 表示 采用 S P S S1 2 0 软件包分析对实验数据进行O n e w a y A N O V A 分析及L S D 两两比较 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 8N o v 2 4 1 1 1 5 1 5 F i g1F C I I I h I Ap I o 埘a J u i l y a en

13、鲫舭缸枷g r o u p s A N o r m lc o n t r o l B 蜘t t r yg r o u l D C E F B5 0 0r i g L 一1 D E F B5 0l a g L 一1 E E F B5n g L 一1 2 结果 2 1 实验各组药物对E C V 3 0 4 细胞细胞周期的影 响各实验组D N A 倍体分析图可见 仅损伤组在 G o G 期之前出现明显的亚二倍体 提示有凋亡现 象 对各组s 期 G o G 期细胞的百分比进行统计 学分析 方差分析的结果 P 0 0 0 1 说明各组间的 差异有统计学意义 L S D 进行两两比较 损伤组G G 期细胞

14、比例高于对照组 S 期细胞百分比低于对 照组 P O 0 1 而蚤休醇提物各浓度组预处理后 G G 期细胞比例低于对照组 s 期细胞百分比高于 对照组 P 0 0 5 见流式细胞仪P I 染色D N A 倍体分析结果 F i g1 及统计分析结果 T a b1 T 曲1E t Y e e t so f m 蚰1 3 0 G ia n dSs t a g e i nc e l lc y c l e x I 5 n 5 G r o u pG G l s G 2 M N o r m a l5 2 8 4 4 7 6 3 9 0 9 3 7 6 1 0 0 7 1 0 1 I l l j u 玎6 2

15、 2 6 5 1 2 2 5 6 8 1 8 91 2 1 7 1 2 5 E F B5 0 0r i g L 5 0 1 3 4 7 5 3 7 6 7 2 5 4 1 2 2 1 1 7 E F B5 0n g L 1 3 8 9 9 3 3 t 14 9 8 8 4 7 5 1 1 1 4 O 8 7 E F B5 峭 L 1 5 5 9 1 5 7 23 5 6 9 4 0 8 8 3 9 O 9 2 P 0 0 1 踯c o n t r o l 尸 0 0 1 i n j u r y 2 2实验各组药物对E C V 3 0 4 细胞凋亡的影响 按照A n n e x i nV P I

16、 F I T C 荧光染色结果的判定标准 早期与晚期凋亡率即第二象限与第三象限之和 对 实验散点图相应数据进行统计学分析 结果显示 正 常对照组的为 2 2 7 5 2 1 4 而损伤组达 4 3 1 8 3 5 8 损伤组凋亡率比对照组明显增加 P 0 0 1 而各蚤休醇提物组预处理后分别为 2 3 5 7 1 9 8 2 4 6 4 2 4 0 2 7 3 5 2 7 7 与损 伤组相比均明显下降 P 0 0 5 见 F i g2 3 2 3 实验各组药物对E C V 3 0 4 细胞c 嬲p a 3m R N A 的表达的影响e 鹪p a s e 3 的扩增产物的大小为 5 3 3b p

17、 H 2 0 2 刺激损伤后 c 嬲p 蹴 3m R N A 的表达量 与内参照灰度值之比最大 F i g4 与正常对照组相 比明显增加 P 0 0 1 而各蚤休醇提物预处理组 e a s p a s e 3m R N A 的表达量减少 与损伤组相比差异 有显著性 P 0 0 1 并且在高浓度预处理组表达 低于低浓度预处理组 P 0 0 1 见T a b2 T a b 2 0 f 啪蚰伪甲糯om R N A 既p 触i n I h c e d b yH 2 0 z i 5 l 5 G r o u p N n a l I n j I l l y E F B5 0 0n t g L 一1 E F

18、B5 0r i g L 1 E F B5l l g L c p 舶e 3m B N Ae x p r e s s i o n 1 4 5 8 1 1 9 3 2 2 1 4 1 5 2 1 2 2 3 6 3 2 5 1 4 2 7 l 钟 2 6 8 9 0 7 9 P 0 0 1 懈c o n t r o l 辨P 0 0 1 蟠i n j u r y P O 0 1 懈l o wd e m i t 万方数据 1 5 1 6 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8N o v 2 4 1

19、 1 F i g2A n a y t l er e s u l to fE F B o ne a r l ya n dl a t ea p o p t o 幽r a t e A N o r m a lc o n t r o l B h j u r yg r o u p C E F B5 0 0n g L D E F B5 0r i g L E E F B5n g L 1 AB C D E F i g3A r m 蚶cr e s u l to fE F Bo ne a r l ya n d l a t ea p o p t o s i sr a t e 5 n 5 A N o r m a lc

20、o n t r o l B I n j u r yg r o u p C E F B5 0 0n g L 1 D E F B5 0 n g L 一1 E E F B5n g L P O 0 1 c o n t r o l P 0 O l 姆 蜘u r y 3 讨论 蚤休 又称七叶一枝花 其基源为百合科重楼 属的多种植物 药用历史悠久 其以蚤休之名首载 于 神农本草经 唐本草 申录别名为重楼 是传 r i g4 T h ee f f e c to fE F Bo nt h em R N Ae x p r e s s i o n o fc a s p a s e 3o fE C V 3 0 4i

21、n d u c e db yH 2 0 2 M M a r k e r A N o r m a lc o n t r o l B t n j u r yg r o u p C E F B5 0 0n g L D E F B5 0n g L E E F B5n g L 1 统的清热解毒类药物 蚤休的药理活性多样 近年 来国内外学者着眼于其生理活性和独特的药用价 值 6 运用现代药理方法 为中药蚤休的一些临床应 用提供了理论依据 同时也发现了它的一些新作用 本研究首次在保护内皮细胞氧化损伤的角度 探讨 蚤休醇提物对细胞周期与凋亡的影响 细胞凋亡是受基因调控的精确过程 其途径主 要有两条 一条是死亡

22、受体通路 配体和受体结合形 成诱导凋亡的复合信号物而激活c a s p a s e 一条是线 粒体通路 释放凋亡酶激活因子激活c a s p a s e 两条通 路最后都汇聚于c a s p a s e 3 活化这一点上 c a s p a s e 3 是c a s p a s e s 家族中最特征化的一个酶 被称谓凋亡 信号的主要执行者 c e n t r a le x e c u t i o n e r 一旦活化 c a s p a s e 3 可以裂解许多涉及细胞结构 信号传导和 与D N A 修复有关的蛋白 最终引起细胞凋亡 J 7 8 1 对于细胞周期 细胞凋亡既有联系又不完全一致

23、如 细胞凋亡的增多可能伴有细胞增殖的抑制即细胞周 期的改变 但二者改变程度并不一致 但H O 引起 的细胞凋亡很可能有多个信号传导途径参与的过 程 正常细胞在遭遇损伤和应激等刺激后细胞周期 的正常进行被破坏一J D N A 片断化发生于细胞凋 亡的晚期 是细胞凋亡特有的现象 引 凋亡的细胞因D N A 分裂成一些小片段漏出 使 D N A 直方图上出现一个位于G 峰左侧的小峰 即凋 亡 a p o 峰 G 2 M 期阻滞是凋亡的前提条件 从实 验结果中可以看出 本实验中损伤组的细胞G 期 S 期细胞比例降低 这表明进入增殖期细胞比例降低 s 期比例降低 其意味着D N A 合成减少 G 期比例

24、 降低说明细胞分裂减慢 进而说明了氧化损伤具有 抑制细胞D N A 合成 细胞分裂和增殖的作用 因而 我们推断H O 诱导的细胞凋亡可能发生于G 期 如钙 弘如笛加 m O o 芒sI o五oci o苗一专冒舀 万方数据 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 8N o v 2 4 1 1 1 5 1 7 而不是以前认为的G M 期 本实验中 损伤组的 e a s p a s e 3 在m R N A 水平上表达最高 说明氧化损伤 也启动了经c a s p a s e 3 的凋亡信号的转导 导

25、致细胞 的凋亡甚至死亡 蚤休醇提物干预后表达下降 推测 应是阻抑细胞周期由G 期至S 期的转化同时阻断 细胞凋亡相关蛋白的表达而发挥保护作用 两者之 间是否存在一定的关联 尚需进一步的研究证实 中草药中含有丰富的自由基清除成分 本研究 对蚤休药理药效进行了研究 表明蚤休提取物具有 一定的抗氧化性 而机体的许多病理生理现象如衰 老 动脉粥样硬化 缺血 再灌注损伤都与自由基对 机体的氧化损伤有关 因此本实验首次发现了蚤休 醇提物的生物学效应 初步肯定此药物对内皮细胞 氧化损伤的保护作用 但是m R N A 要经过转录和翻 译后才能表达有功能的蛋白 所以仍需在蛋白质水 平上对蚤休醇提物抑制血管内皮细

26、胞凋亡的机制进 行探讨 参考文献 1 R o s sR A t h e r o s c l e r e s i s A ni n f l a m m a t i o nd i s e a s e J NE n 9 1 M e d 1 9 9 9 3 4 0 2 1 1 5 2 3 2 H t k a I n pMA d eB o e r0J v s nd e rL o o sCM e la 1 A d v e n t i t i a l i r f f d t r a t e sa s s o c i a t e dw i t ha d v a n c e da t I I e m s c k

27、 眦i cp I 矗q R e 8g t u i l c t u r a lo r g a n i z a t i o ns u g g e s t sg e n e r a t i o no fl o c a lh u m o r a li l l l n a u n e 睁 s p o n s e s J JP a t h o 2 0 0 1 1 9 3 2 2 6 3 9 3 S t r a t f o r dN B r i t t e nK G a l l a g h e rP I n f l a m m a t o r yi n f i l t r a t e si nh a n M

28、 i nc o r o n a r ya t h e r o s c l e r o s i s J J A t h e r o s c e r o s s 1 9 8 6 5 9 3 2 7 1 6 4 杜艳芝 闫晓梅 胡维诚 等 清热解毒液对高脂血症大鼠内皮 素影响的研究 J 中国病理生理杂志 1 9 9 9 1 5 1 2 1 1 3 4 7 4 D uYz Y a hXM H uWC e ta 1 T h ee f f e c to fh e a t c l e a r i n ga n d d e t o x i f r i n gf l u i do ne n d o t h e

29、l i ni nh y p e d i p i d e m i er a t a J C h i n f 乜k 咖 f D f 1 9 9 9 1 5 1 2 1 1 3 4 7 5 王建中 临床流式细胞分析 M 上海科学技术出版社 2 0 0 5 2 7 6 1 5 W a n dJz C n c a 加 c y t o m e t r y M S h a n g h a iS c i e n t i f i ca n d T e c h n i c a lP u b l i s h e r s 2 0 0 5 2 7 6 1 6 张霄霖 刘月婵 重楼的研究与应用 J 中国中医药科技 2 0

30、 0 0 7 5 3 4 6 7 6 Z h a n gXL L i uYc S t u d ya n da p p l i c a t i o no nb i s t o r t a e J C h i n 例T e c h n o l 2 0 0 0 7 5 3 4 6 7 7J G r a n v i l l eDJ S h a wJR L e o n gS e ta 1 R e l e a s eo fc y t e c h r o m eC B a xm i g r a t i o n B i dc l e a v a g e a n da c t i v a t i o no fc

31、 a s p a s e s2 3 6 7 8 a n d9d u r i n ge n d o t h e l i a lc e l la p o p t o s i s J A mJP a t h o l 1 9 9 9 1 5 5 1 0 2 1 5 8 李花 邓常清 陈北阳 等 三七总皂苷对大鼠脑缺S t 再灌注 后c a s p a s e 表达的影响 J 中国药理学通报 2 0 0 6 2 2 2 1 8 9 9 3 8 u H D e n g C Q C h e nB Y da 1 E f f e c t so f P a n a x N o t o g i n s e n gS

32、 a p o n i n s e x p r e s s i o no fC a s p a s ea f t e rf o c a lc e r e b r ali s c h e m i a r e p e r f u s i o ni nr a t s J 吼缸P l m r m a o lB u l l 2 0 0 6 2 2 2 1 8 9 9 3 9 沈丽霞 赵丕文 牛建昭 王继蜂 金雀异黄索和槲皮察对人类 乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响 J 中国药理学通报 2 0 0 8 2 4 1 5 9 6 2 9 S h e nLX Z h a oPW N i uJz W a n gJF

33、E f f e c to fg e n i s t ei na n d q u e r c e t i no np r o l i f e r a t i o na n dc e l lc y c l ei nh u m a nb r e as tc a r ei n o m c e l l s J C h n P h a r m a c d B u l l 2 0 0 8 2 4 1 5 9 6 2 1 0 T a c c h e t t ic T a v e l l as D o z i nB e ta 1 C e l le o n d e n q t i o ni nc h o n d

34、r o g e n i ed i f f e r e n t i a t i o n J 脚伽R e s 1 9 9 2 2 0 0 1 2 6 3 3 E f f e c t so fb i s t o r t a ee t h a n o le x t r a c t i o no nc e l lc y c l ea n da p o p t o s i s o fE C V 3 0 4i n j u r e db yh y d r o g e np e r o x i d e G A oL i n 1 i n l L IF u t o n g K A N GL i l S IY a n

35、 h o n g W A N GH a 0 2 H UW e i c h e n 9 3 1 D e p to f P a t h o p h y s i o l o g y T a i s h a nM e d i c a lC o l l e g e T a i a nS h a n d o n g2 7 1 0 0 0 C h i n a 2 S h a n d o n gU n i v e r s i t yo f T r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e J i n a n 2 5 0 0 1 4 C h i n a 3 M

36、e d i c a lC o l l e g eo f S h a n d o n gU n i v e r s i t y J i n a n2 5 0 0 1 2 C h i n a A b s t r a c t A i m T om a k ee t h a n o lf r o mb i s t o r t a e n i n gr e s u l ts h o w e de a d ya n da d v a n c e ds t a g ea p o p t o s i s E F B f r o mt r a d i t i o n a lC h i n e s em e d

37、i c i n eb i s t o r t a e a n d i n v e s t i g a t et h ep r o t e c t i o n o nt h ei n j u r yo ft h eh u m a n u m b i l i a rv e i ne n d o t h e l i a lc e l l E C V 3 1 M i n d u c e db y h y d r o g e np e r o x i d e H 20 2 M e t h o d s E C V 3 0 4c e l l s w e r ec u l t u r e da n dd i

38、v i d e db yf i v ee x p e r i m e n t a lg r o u p s i n c l u d i n gn o r m a l i n j u r ym o d e li n d u c e db y H 2 0 2a n d t h r e ep r e t r e a t e dg r o u p sw i t hE F B f l o wc y t o m e t r y F C M m e t h o d sA n n e x i nv P Is t a i n i n ga n dP Is t a i n i n gw e r eu s e dt

39、 oa n a l y z et l l ee f f e c to ft h em e d i c i n eo n t h ea p o p t o s i sa n dc e l lc y c l e r e v e r s et r a n s c r i p t i o nP C R R T P C R w a su s e dt od e t e c t t h em R N Ae x p r e s s i o n l e v e lo fa p o p t o s i sa s s o c i a t e dp r o t e i nc a s p a s e 3i na l

40、le x p e r i m e n t a lg r o u p s R e s u l t s F C MA n n e x i nV P Is t a i r a t ew a sl o w e rw h e np r e d i s p o s e dt h a nt h a to ft h ed a m a g e dg r o u p F C MP Is t a i n i n gs h o w e dt h e r ew e r em o r e c e l l si n G o G ls t a g ei n o x i d a t i o nd a m a g eg r o

41、u p b u t l e s si nSs t a g e a n dh y p o d i p l o i dp e a kc o u l db eo b s e r v e d R T P C Rs h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o no fe a s p a s e 一 3w a sw e a k e n e dw h e np r e d i s p o s e db yE F Bt h a nw i t h o u t t h i sd i s p o s a l P 0 0 1 C o n c l u s i o n sE F Bh a

42、 st h e p r o t e c t i v ea c t i o no no x i d a t i v ed a m a g eo fE C V 3 0 4i n d u c e db yH 2 0 2 t h em e c h a n i s mm a yr e l a t et ot h ep r o t e c t i o no fn o m a lc e l lc y c l ea n dt h ed e c r e a s eo ft h ec e l l s i g n a lt r a n s d u c t i o no fa p o p t o s i sv i ac a s p a s e 3 K e yw o r d s e n d o t h e l i a lc e l l e t h a n o lf r o mb i s t o r t a e o x i d a t i o n i n j u r y c e l lc y c l e a p o p t o s i s e a s p a s e 3 万方数据